核酸染料是分子生物學(xué)實驗中不可或缺的試劑，其中溴化乙錠(EtBr)因其高靈敏度，長期以來一直被用作核酸染色的標準染料。但是EtBr具有潛在的誘變和致癌作用，EtBr能與DNA嵌合，引起細胞突變，長期接觸可能對人體健康產(chǎn)生負面影響。NIPPON GENETICS推出的新型MIDORIGreen系列核酸染料，是一種非致癌性和非致突變性的染料，無法穿透乳膠手套和細胞膜。同時致突變性試驗（Ames試驗）和細胞毒性試驗均為陰性，因此是一種高安全度的核酸染料[1]。

紫外光與EtBr染色至今仍一起被用于分子生物學(xué)實驗室中檢測核酸。然而紫外光譜會導(dǎo)致DNA樣品的修飾和降解，30秒的紫外線曝光足以大幅降低克隆效率。藍/綠LED在470 nm - 520 nm處發(fā)出安全可見光，這種光譜對 DNA 沒有破壞性，與紫外光相比，DNA完整性和克隆/測序效率完全不受影響，即使在長時間的光照下也是如此。MIDORIGreen系列核酸染料經(jīng)過優(yōu)化，可在紫外光或藍/綠光激發(fā)時獲得更亮的信號，同時也兼容紫外光。

圖1：EtBr和MIDORIGreen吸收光譜對比

MIDORIGreen產(chǎn)品特點

?      出色的信號質(zhì)量

?      用于凝膠內(nèi)染色和后染色的安全核酸染料

?      溴化乙錠的安全替代品：非致癌無毒

?      適用dsDNA、ssDNA或RNA染色

?      膠染法和泡染法均可

MIDORIGreen Advance

MIDORIGreen Advance靈敏度與EtBr相當，可以直接添加到熔融的瓊脂糖中。同時兼容紫外線或藍/綠LED，因此無需更改原有的實驗步驟。MIDORIGreen Advance的稀釋倍數(shù)可高達1：25000。100 mL瓊脂糖凝膠只需4μL至6μL，每1mL的染料可配置約17L至25L瓊脂糖凝膠。

MIDORIGreen Direct

MIDORIGreen Direct中已經(jīng)包含10X Loading Buffer，可以直接添加到核酸樣品中，無需將其或任何其他染料添加到凝膠基質(zhì)。相較于在凝膠中添加染料的染色方式，核酸的直接染色消除了背景染色，提供了完美的信噪比。1 mL的 MIDORIGreen Direct足夠提供1,000至2,000個樣品的染色。

MIDORIGreen Direct可以為下游提供更好的結(jié)果。

從瓊脂糖凝膠中分離核酸可以進一步下游應(yīng)用，許多染料，如EtBr甚至SYBR? Green，由于其嵌入特性，都是強酶抑制劑。而MIDORI Green 染料與 DNA 骨架結(jié)合的方式能為下游應(yīng)用帶來更高的效率，包括克隆、測序、PCR等。[2]

MIDORIGreen Xtra

MIDORIGreen Xtra是NIPPON GENETIC最新一代核酸染料，針對藍/綠LED和藍LED光源進行了優(yōu)化，可以在瓊脂糖凝膠中產(chǎn)生強熒光信號。同時MIDORIGreen Xtra不會對瓊脂糖凝膠進行染色，因而具有很低的背景噪音，從而獲得出色的信噪比。由于非常低的背景熒光，這使得識別少量 DNA 變得非常容易，因此MIDORIGreen Xtra具有超高靈敏度。

圖3：使用MIDORI Green Xtra檢測的DNA條帶具有超高靈敏度（注：左圖使用藍色/綠色 LED 透射儀進行檢測；右圖使用藍色LED透射儀進行檢測。）

MIDORIGreen easy

MIDORIGreen easy具有與MIDORIGreen Xtra相同的出色信號質(zhì)量和低背景，擁有比EtBr更好的信號，MIDORIGreen easy的開發(fā)是為了可以輕松替換SYBR®safe，同時染色方案不需要改變。MIDORIGreen Easy的稀釋倍數(shù)可高達1：10000，100 mL瓊脂糖凝膠只需8μL至10μL。

圖4：MIDORIGreen easy（左）與MIDORIGreen Xtra（右）使用藍/綠 LED 激發(fā)燈。

MIDORIGreen系列檢測光譜與靈敏度

注: √表示兼容；?表示兼容但不推薦；

MIDORIGreen核酸染料系列產(chǎn)品列表

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